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如何選擇合適的核酸提取儀
生物技術的發展日新月異。隨著PCR技術在各個領域的應用,包括醫學上的疾病檢測、農業上的轉基因檢測等諸多應用,高通量的樣品核酸提取變得極為迫切。很多公司都推出了各種原理的自動核酸提取儀,讓人摸不著頭腦,也很吸引人。有的沒用,有的貴,不好用。如何選擇一個?
核酸提取儀是使用匹配的核酸提取試劑,自動完成樣品核酸提取的儀器。廣泛應用于疾病控制中心、臨床疾病診斷、輸血安全、法醫鑒定、環境微生物檢測、食品安全檢測、畜牧業、分子生物學研究等諸多領域。
核酸提取儀分類
1.根據不同尺寸的儀器。
1)自動液體工作站
自動液體工作站是一個非常強大的設備,它可以自動分配和吸取液體,甚至通過集成擴增和檢測功能,實現標本提取、擴增和檢測的全自動化。提取核酸只是其功能的一個應用,不適合常規的實驗室提取核酸。一般適用于單一種類標本的實驗要求,一次可抽取非常大量的標本(至少96個,一般為數百個)。自動化工作站平臺的建立和運行需要相對較大的資金。
2)小型自動核酸提取儀
小型自動化儀器通過操作結構的特殊性,可以自動提取核酸,可以應用于任何實驗室。
2.根據提取原理,可以分為不同的類別。
1)儀器采用離心柱法
離心柱法核酸提取儀主要采用離心機和自動移液裝置相結合的方法。通量一般為1-12個樣品,操作時間與人工提取幾乎相同。不能提高實際工作效率,而且貴。不同類型儀器的耗材不能通用,只適合資金充足的大實驗室。
2)使用磁珠法的儀器
以磁珠為載體,基于磁珠在高鹽低PH值下吸附核酸,在低鹽高PH值下與核酸分離的原理,通過移動磁珠或轉移液體即可實現核酸提取純化的全過程。由于其原理的獨特性,可以設計成多種通量,單管或8-96個樣品即可提取。而且其操作簡單快捷,提取96個樣品僅需30-45分鐘,大大提高了實驗效率,成本低廉。因此可以在不同的實驗室使用,是目前市場上的主流儀器。
自動磁珠法核酸提取儀可分為磁棒法和吸引法。
先說抽吸法:顧名思義,抽吸法是通過自動移液裝置進行,通過加入裂解液和磁珠進行吸附;去除裂解物,加入沖洗液,用磁珠吸附,去除沖洗液,加入洗脫緩沖液。從步驟上看似乎沒有什么問題,但是吸法大的問題是為了去除廢液,移液管不能離磁珠太近,以免磁珠和廢液一起被吸走,以至于每次抽廢液總有一小部分吸不完,特別是底部有磁鐵的裝置。因為磁珠是被磁鐵吸附在底部的,所以移液管不要太靠近底部,這樣沖洗液就不能完全去除,殘留的沖洗液中的鹽和乙醇都會對其產生影響。磁體一側的裝置會有較少的殘液,但洗脫效率也不好。要靠DNA自己溶解到洗脫緩沖液中,除非超過半小時。所以有的96自動核酸提取工作站一輪提取需要150分鐘,32磁棒法同樣的時間可以用五輪。
此外,磁棒法核酸提取儀: flux通常有8、16、32和96個通道。磁棒法與抽吸法相比,優點是每一步的液體都不會殘留,因為磁棒只是帶走磁珠,轉移到下一步對應的反應孔中。另外磁棒法的提取儀裝置應該有更完備的功能,比如加熱,每個加熱槽較好。此外,很重要的一點是,驅動磁棒的電機要能帶動磁棒快速混合攪拌液體,有利于自動化和徹底裂解沖洗。磁棒法的通量選擇較好是32通道,96通道的通量看似更高,但有一個很現實的問題。96個磁棒從一個盤子轉移到另一個盤子,中間磁棒上的液體掉了怎么辦?會掉落到其他孔中造成污染,而32道磁棒的軌跡并不經過其他樣品上方,所以不會產生交叉污染。
磁珠法的基本原理核酸提取儀
1.吸樣法也叫移液法,是通過固定磁珠,轉移液體來提取核酸。一般通過操作系統控制機械臂來實現傳送。提取過程如下:
1)裂解:向樣品中加入裂解液,通過機械運動和加熱使反應液混合并充分反應,細胞裂解,釋放核酸。
2)吸附:在樣品裂解液中加入磁珠,充分混合,利用磁珠在高鹽、低PH值下對核酸親和力強的特點吸附核酸,在外加磁場的作用下,磁珠與溶液分離,用吸頭將廢液罐中的液體去除,丟棄吸頭。
3)洗滌:去除外磁場,用新的吸頭加入洗滌緩沖液,充分混合,去除雜質,在外磁場的作用下去除液體。
4)洗脫:去除外磁場,用新的吸頭加入洗脫緩沖液,充分混合,使結合的核酸與磁珠分離,得到純化的核酸。
2.磁棒法
磁棒法是通過固定液體和轉移磁珠來分離核酸。原理和過程與抽吸法相同,不同的是磁珠與液體分離的方式。磁棒法是通過磁棒的吸附作用將磁珠從廢液中分離出來,放入下一種液體中實現核酸提取。
磁珠法核酸提取儀的特點
1.它可以實現自動化和高通量操作。
2.操作簡單快捷。
3.安全環保。
4.高純度和高收率。
5.無污染,結果穩定。
6.成本低,便于廣泛應用。
7.可以同時處理不同類型的樣品。
需要注意的事項
1.儀器安裝環境:正常大氣壓(海拔應低于3000米),溫度20-35℃,典型使用溫度25℃,相對濕度10%-80%,35℃或以下空氣順暢流入。
2.避免將儀器放置在熱源附近,如電加熱器;同時,為防止電子元件短路,應避免水或其他液體濺入其中。
3.進氣口和出氣口位于儀器背面,防止灰塵或纖維聚集在進氣口,保持風道暢通。
4.核酸提取儀離其他垂直面至少10cm,
5.儀器接地:為了避免觸電,儀器的輸入電源線必須接地。
6.遠離帶電電路:操作人員不得擅自拆卸儀器,更換部件或機器內部調整必須由經過認證的維修人員完成。不要在電源打開時更換組件。
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