隨著分子生物學(xué)技術(shù)的快速發(fā)展，分子診斷和檢測(cè)技術(shù)如核酸雜交、核酸擴(kuò)增和核酸序列分析變得越來越重要。樣品預(yù)處理占整個(gè)分析過程的60%，90%的檢測(cè)誤差發(fā)生在預(yù)處理環(huán)節(jié)。核酸的提取是分子診斷實(shí)驗(yàn)的“一步”，也是最關(guān)鍵的一步。獲得的核酸質(zhì)量直接影響下游分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的成敗。

國內(nèi)二級(jí)醫(yī)院、三級(jí)醫(yī)院、疾病預(yù)防控制中心、第三方檢測(cè)等符合國家新冠肺炎檢測(cè)要求的機(jī)構(gòu)將繼續(xù)接收大量新冠肺炎檢測(cè)需求。與此同時(shí)，很多省份都出臺(tái)了政策文件，在全省范圍內(nèi)擴(kuò)建醫(yī)院，尤其是二級(jí)醫(yī)院。面對(duì)市場(chǎng)上的各種產(chǎn)品，如何選擇一款合適的核酸自動(dòng)提取儀需要仔細(xì)分析。

1.核酸提取原理

使用離心柱法的儀器

離心柱法核酸提取儀主要采用離心機(jī)與自動(dòng)移液裝置相結(jié)合的方法。通量一般為1-12個(gè)樣本，操作時(shí)間與人工提取相差無幾，無法提高實(shí)際工作效率。而且價(jià)格昂貴，不同類型的儀器耗材無法通用，只適合資金充足的大型實(shí)驗(yàn)室使用。

帶有磁珠法的儀器

以磁珠為載體，利用磁珠在高鹽低pH時(shí)吸附核酸而在低鹽高PH時(shí)與核酸分離的原理，通過移動(dòng)磁珠或轉(zhuǎn)移液體的方式對(duì)核酸進(jìn)行全過程提取純化，由于其原理的獨(dú)特性，可以設(shè)計(jì)成多種通量，單管提取或8-96個(gè)樣品提取，操作簡單快捷。一批提取時(shí)間為9-40min(不同廠家樣品不同)，大大提高了實(shí)驗(yàn)效率，成本低。所以可以用在不同的實(shí)驗(yàn)室，是目前市場(chǎng)上的主流儀器。

磁珠法自動(dòng)核酸提取儀分為磁棒法和吸引法。

抽吸法

顧名思義，吸樣是通過自動(dòng)移液裝置進(jìn)行的。磁鐵分為底部和側(cè)面兩種裝置。抽吸法的問題是，為了在不去除磁珠的情況下去除廢液，移液管不能離磁珠太近，以防磁珠隨廢液一起被去除。1)底部有磁鐵的裝置，由于磁珠被磁鐵吸附在底部，使得漂洗液無法完全去除，殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會(huì)影響后續(xù)的洗脫效率和PCR成功率；2)側(cè)面有磁鐵的裝置會(huì)有較少的殘液，但洗脫效率也不好。要靠DNA自己溶解到洗脫緩沖液中，除非超過半小時(shí)。所以有些96自動(dòng)核酸抽取工作站抽取一發(fā)子彈需要150分鐘，同樣時(shí)間的32磁棒法可以抽取五發(fā)。

磁棒法核酸提取儀

通常，有8、16、32和96個(gè)通量通道。磁棒只是帶走磁珠，轉(zhuǎn)移到下一步對(duì)應(yīng)的反應(yīng)孔。此外，磁棒法的提取儀裝置應(yīng)具有更完善的功能，如加熱，每個(gè)加熱罐應(yīng)獨(dú)立控溫，以便設(shè)置不同的加熱、裂解和洗脫溫度。還有一點(diǎn)很重要，驅(qū)動(dòng)磁棒的電機(jī)要能驅(qū)動(dòng)。

磁棒法核酸提取儀混合法

1)搖動(dòng)混合:通過磁棒的上下振動(dòng)來混合磁珠和核酸是目前市面上主流的方法。

2)旋轉(zhuǎn)混合:通過磁棒的旋轉(zhuǎn)將磁珠和核酸混合。與傳統(tǒng)的振蕩混合技術(shù)相比，氣溶膠產(chǎn)量大大減少了50%以上。交叉污染帶來的假陽性風(fēng)險(xiǎn)得到更有效的控制，進(jìn)一步保證了實(shí)驗(yàn)結(jié)果的準(zhǔn)確性。此外，旋轉(zhuǎn)共混法可以大限度地保留DNA的長鏈，減少核酸的機(jī)械斷裂，提高后續(xù)檢測(cè)的靈敏度。

買了儀器之后，一定要考慮以后使用配套試劑的問題:

1)匹配的試劑是否完整。不同樣品類型試劑 box產(chǎn)品鏈的提取是否完整？

2)配套的試劑是預(yù)包裝的。非包裝試劑需要實(shí)驗(yàn)室工作人員用移液管試劑加入裂解液、洗滌液和洗脫液，不減少人工操作時(shí)間；

3)除了在提取前加入樣品。需要加蛋白酶K嗎？因?yàn)橛行┕具€沒有掌握將蛋白酶K預(yù)包裝在裂解液中并在室溫下保存的技術(shù)，蛋白酶K需要在-20℃下單獨(dú)保存，所以需要立即添加。每個(gè)樣品多加一步蛋白酶K，K，96個(gè)樣品的作用時(shí)間增加約10~15min。

4)匹配的保存溫度試劑。有些廠家需要在2-8℃運(yùn)輸試劑，冷鏈運(yùn)輸增加了運(yùn)輸成本，需要在冰箱，而預(yù)包裝萃取試劑體積較大，像新冠肺炎大量使用時(shí)冰箱/kloc-5不夠一段時(shí)間。

5)提取后的擴(kuò)增效率。提取核酸時(shí)觀察磁珠殘留率并檢查提取的核酸質(zhì)量！

儀器使用的便利性

應(yīng)該考慮使用儀器的方便性。中文界面有利于學(xué)習(xí)如何使用儀器和編輯程序，減少新操作人員的誤操作和實(shí)驗(yàn)失敗的風(fēng)險(xiǎn)。

博科公司售后服務(wù)體系

正如醫(yī)療器械，簡單的實(shí)驗(yàn)關(guān)系到診斷，甚至關(guān)系到成千上萬人的生命安全。儀器廠商的售后團(tuán)隊(duì)是購買儀器時(shí)要考慮的軟實(shí)力，強(qiáng)大、經(jīng)驗(yàn)豐富的售后支持團(tuán)隊(duì)是購買儀器的重要后盾。售后團(tuán)隊(duì)需要做的是:

1)負(fù)責(zé)處理訓(xùn)練實(shí)驗(yàn)中的常見問題和簡單故障；

2)負(fù)責(zé)培訓(xùn)設(shè)備的日常維護(hù)；

3)提供臨床常用PCR檢驗(yàn)項(xiàng)目的技術(shù)資料；

4)安排技術(shù)人員對(duì)全院醫(yī)務(wù)人員進(jìn)行集中科普講座；

5)接到服務(wù)電話后2小時(shí)內(nèi)響應(yīng)，形成解決方案，技術(shù)支持人員及時(shí)上門解決；